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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC0210-50T/48S
更新時間：2024-04-03
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：2260
010-50973130
產品分類
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苯BING氨酸解氨酶（PAL）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC0210
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×3瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前取1瓶加入4 mL蒸餾水充分溶解待用；現配現用。2-8℃可以保存2周。
產品簡介：
PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數微生物中，是植物體內苯丙烷類代謝的關鍵酶，與一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關，在植物正常生長發育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。PAL催化L-苯BING氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有最大吸收值，通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至290nm，蒸餾水調零。
2、操作表
試劑名稱 | 測定管（μL） | 空白管（μL） |
樣本 | 20 | |
試劑一 | 780 | 800 |
試劑二 | 200 | 200 |
混勻，30℃準確水浴30min | ||
試劑三 | 40 | 40 |
混勻，靜置10min后，在290nm處記錄測定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。（空白管只需做1-2次）
三、PAL活性計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個酶活力單位。
PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷0.1÷（Cpr×V樣）÷T =17.3×ΔA ÷Cpr
（2）按樣本質量計算：
單位的定義：每g組織在每mL反應體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個酶活力單位。
PAL（U/g 質量）=ΔA×V反總÷0.1÷（V樣÷V提取×W）÷T =17.3×ΔA ÷W
V樣：加入樣本體積，20µL=0.02mL；V反總：反應總體積，1.040mL；V提取：加入提取液的體積，1mL；T：反應時間，30min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
相關發表文獻：
[1] Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus) [J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.
[2] Zhang J, Lv J, Xie J, et al. Nitrogen Source Affects the Composition of Metabolites in Pepper (Capsicum annuum L.) and Regulates the Synthesis of Capsaicinoids through the GOGAT–GS Pathway[J]. Foods, 2020, 9(2): 150.
參考文獻：
[1] Ayda? S B, Ozturk S, Asl?m B. Phenylalanine ammonia lyase (PAL) enzyme activity and antioxidant properties of some cyanobacteria isolates[J]. Food chemistry, 2013, 136(1): 164-169.
[2] Rosler J, Krekel F, Amrhein N, et al. Maize phenylalanine ammonia-lyase has tyrosine ammonia-lyase activity[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 175-179.
[3] Cheng G W, Breen P J. Activity of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and concentrations of anthocyanins and phenolics in developing strawberry fruit[J]. Journal of the American Society for Horticultural Science, 1991, 116(5): 865-869.
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