單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC0650
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入5 mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存；

2. 試劑三：臨用前加入5 mL蒸餾水充分溶解，可溶解后分裝-20℃保存，避免反復凍融；

3. 試劑四：液體置于試劑瓶內EP管中。臨用前加5 mL試劑一充分溶解，可溶解后分裝-20℃保存，避免反復凍融。

產品說明：
MDHAR催化MDHA還原生成AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。
MDHAR催化NADH還原MDHA生成AsA和NAD⁺，NADH在340nm有特征吸收峰，但是NAD⁺沒有。通過測定340 nm光吸收下降速率，來計算出MDHAR活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
研缽/勻漿器、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調式移液槍和雙蒸水。
操作步驟：“具體操作步驟詳見“產品資料"附件"
注意事項：
當ΔA測定大于0.3時，建議客戶稀釋樣本或者調整試劑一和上清液的比例（如將400μL試劑一+300μL上清液改為600μL試劑一+100μL上清液）后進行測定。
當ΔA測定過小時，建議客戶提高樣本量或者調整試劑一和上清液的比例（如將400μL試劑一+300μL上清液改為200μL試劑一+500μL上清液）。
當A1大于1.5時，建議將樣本稀釋進行測定。
空白管為檢測各管試劑組份的檢測孔，正常情況下，其OD值在0.5左右，變化不超過0.01。
由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

實驗實例：

1. 取0.1g橙子果肉加入1mL提取液進行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上，按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.827-0.8=0.027，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.536-0.532=0.004，按樣本質量計算酶活得：

MDHAR 活性(U/g 質量) =0.268×(ΔA測定管-ΔA空白管) ÷W=0.268×(0.027-0.004) ÷0.1=0.06164U/g 質量。
相關發表文獻：

1. Yali Zhou,Sufang Huo,Liting Wang,et al. Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings. Plant Physiology and Biochemistry. September 2018;(IF3.404)

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