儲存條件
-20℃
中文名稱
吡咯啉-５-羧酸合成酶活性檢測試劑盒其它
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Δ1-pyrroline-5-carboxylate(P5CS) synthetase Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC4420-50T/48S

更新時間：2024-04-16

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：979

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

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基因標記

產(chǎn)品介紹

1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

貨號: BC4420

規(guī)格: 50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液一	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液體0.6 mL×1支	-20℃保存
試劑一	液體40 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體6 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑四	粉劑×2瓶	-20℃保存

溶液的配制：

1、試劑三：臨用前加入2.5 mL蒸餾水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用，-20℃分裝保存，-20℃保存一周；

2、試劑四：臨用前每瓶加入3 mL蒸餾水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用，-20℃分裝保存，-20℃保存一周。

產(chǎn)品說明：

在干旱、鹽漬化、重金屬、紫外線等不同的脅迫條件下，均會誘導植物體內(nèi)脯*酸的積累，對植物起到保護作用。高等植物中，脯*酸的合成有兩條途徑，分別以谷*酸和鳥*酸為前體。谷*酸途徑主要負責脅迫條件下脯*酸的積累，而鳥*酸途徑主要在氮充足條件下起作用，與脅迫情況下脯*酸的積累沒有關系。

1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）是脯*酸的谷*酸合成途徑中的關鍵酶，P5CS是一個雙功能酶，在NADPH和ATP作用下，可催化谷*酸磷酸化及谷*酸 γ-半醛還原，通過測定NADPH在340 nm處吸光度的變化，可計算出P5CS的活性高低。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1 mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

組織樣本：按質(zhì)量（g）︰提取液體積（mL）1︰5~10比例（建議稱取0.1 g樣本，加入1.0 mL提取液一）加入提取液一，再加入10 μL提取液二，冰浴勻漿后于4℃，8000 rpm，離心15 min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。

二、測定步驟

1、分光光度計預熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至340 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑三、試劑四置于冰上待測。

3、操作表：（在1 mL石英比色皿中操作）

試劑名稱（μL）	空白管	測定管
蒸餾水	100	-
樣本	-	100
試劑一	600	600
試劑二	100	100
試劑三	100	100
試劑四	100	100
在1mL石英比色皿中分別加入上述試劑，充分混勻后于340 nm處測定10s時的吸光值A1，迅速置于37℃水浴鍋/37℃培養(yǎng)箱放置5min，拿出迅速擦干測定5min 10s時的吸光值A2，計算ΔA測定管= A1測定-A2測定，ΔA空白管=A1空白-A2空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。

注意：空白管只需測定1-2次。

三、P5CS酶活計算

1、按樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol NADPH為一個酶活單位。

P5CS酶活（U/mg prot）=ΔA÷ε÷d×V反總×10⁹÷(V樣×Cpr)÷T =321.54×ΔA÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol NADPH為一個酶活單位。

P5CS酶活（U/g 質(zhì)量）= ΔA÷ε÷d×V反總×10⁹÷(W×V樣÷V樣總)÷T =324.76×ΔA÷W

ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，0.001L；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1.01 mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，5 min；10⁹：單位換算系數(shù)，1mol=10⁹nmol。