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當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心生化檢測試劑盒-微量法微量法生化試劑盒BC2665-100T/48S多聚半乳糖醛酸酶(PG)檢測試劑盒 微量法

多聚半乳糖醛酸酶(PG)檢測試劑盒 微量法
產(chǎn)品簡介:

儲存條件
2-8℃
多聚半乳糖醛酸酶(PG)檢測試劑盒 微量法
有效期
6個月
單位

英文名稱
Ploygalacturonase(PG) Activity Assay Kit
別名
多聚半乳糖醛酸酶試劑盒 PG Kit 多聚半乳糖醛酸酶(PG)試劑盒 多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/4

產(chǎn)品型號:BC2665-100T/48S

更新時間:2024-04-16

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪 問 量 :767

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品介紹

多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性檢測試劑盒說明書

微量

貨號: BC2665

規(guī)格:100T/48S

產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體60 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體10 mL×1

2-8℃保存

試劑二

粉劑×1

2-8℃保存

試劑三

液體20 mL×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

粉劑×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑:若溶液中有晶體析出,37水浴溶解;

2、 試劑二:臨用前加入10 mL蒸餾水,60水浴助溶;

3、 標(biāo)準(zhǔn)品:10mg半乳糖醛酸。臨用前加入0.943 mL蒸餾水,配成50 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液;

產(chǎn)品說明:

多聚半乳糖醛酸酶(PloygalacturonasePG)屬果膠酶的一種,廣泛存在于植物、細菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解,在果實軟化、花粉授粉、種子發(fā)育成熟及器官脫落等方面具有重要作用,并且病原菌在侵染宿主植物時,可分泌多聚半乳糖醛酸酶來降解宿主細胞壁,進而導(dǎo)致病程發(fā)展。

PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸與DNS試劑反應(yīng)生成在540 nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì),測定540 nm處吸光值變化可計算得果膠酶活性。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標(biāo)儀低溫臺式離心機、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)1 : 5~10的比例(建議稱取約0.1 g,加入1 mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,16000 g,離心10 min,取上清置于冰上待測。

細菌:先收集細菌到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌數(shù)量(104個)提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500個細菌加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細菌(功率200 W,超聲s,間隔s,總時間5 min);然后4℃,16000 g,離心10 min取上清置于冰上待測。

液體:直接檢測或用提取液稀釋后檢測

二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至540 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 50 μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為654321.5 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3. 操作表:(在1.5mL離心管中)

試劑名稱 (μL)

測定管

對照管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

樣本

25

25

-

-

蒸餾水

-

-

25

-

標(biāo)準(zhǔn)溶液

-

-

-

25

試劑一

50

50

50

50

試劑二

50

-

50

50

40水浴準(zhǔn)確反應(yīng)2 h后,沸水浴加熱10 min(蓋緊,防止水分散失),取出后冷卻至室溫。

-

試劑二

-

50

-

-

試劑三

125

125

125

125

沸水浴加熱5 min(蓋緊,防止水分散失),取出后冷卻至室溫。

吸取200 μL反應(yīng)液,測定540 nm處的吸光度,記為A測定管A對照管A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)計算ΔA=A測定管-A對照管ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管。

三、PG酶活計算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b,將ΔA帶入方程得到xµmol/mL

2. PG酶活的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算

酶活定義:40℃,pH 6.0的條件下,每毫克蛋白每小時分解多聚半乳糖醛酸產(chǎn)生 1 μmol 的半乳糖醛酸定義為一個酶活力單位

PG酶活(U/mg prot= x×V提取÷V提取×Cpr÷T = 0.5x÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計算

酶活定義:40℃,pH 6.0的條件下,每克樣本每小時分解多聚半乳糖醛酸產(chǎn)生 1 μmol 的半乳糖醛酸定義為一個酶活力單位

PG酶活(U/g 質(zhì)量= x×V提取÷W÷T = 0.5W

3)按照細菌數(shù)量計算

酶活定義:40℃,pH 6.0的條件下,104細菌每小時分解多聚半乳糖醛酸產(chǎn)生 1 μmol 的半乳糖醛酸定義為一個酶活力單位

PG酶活(U/104 cell= x×V提取÷T÷細菌數(shù)量(萬個)=0.5細菌數(shù)量(萬個)

4)按液體體積計算

酶活定義:40℃,pH 6.0的條件下,mL樣本每小時分解多聚半乳糖醛酸產(chǎn)生 1 μmol 的半乳糖醛酸定義為一個酶活力單位

PG酶活(U/mL= x×V÷V÷T = 0.5x

V提取:加入提取液體積,1 mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量gV樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.025 mLT酶促反應(yīng)時間2 h

 

注意事項

1、 樣本提取上清液置于冰上待測,且樣本提取完成后建議當(dāng)天提取當(dāng)天內(nèi)測完。

2、 當(dāng)A大于2時,建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定,并在計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

3、 植物果實組織建議將樣本稀釋10倍或20倍后再測定。

4、 若樣本ΔA值偏小,建議延長酶促反應(yīng)時間,并在計算公式中除以相應(yīng)時間。

實驗實例:

1、 0.1g木槿花加入1mL提取液冰浴勻漿后于4℃16000 g,離心10 min,取上清稀釋2后按照測定步驟操作,用微量石英玻璃比色皿測得計算ΔA=A測定-A對照管=1.6843-1.4916=0.1927帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.2426x-0.2979,計算得x=2.022µmol/mL按樣本質(zhì)量計算

PG酶活(U/g質(zhì)量= 0.5x÷W×2(稀釋倍數(shù))=20.22 U/g質(zhì)量。

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC2630/BC2635 果膠酶活性檢測試劑盒

BC3680/BC3685 原果膠含量檢測試劑盒

BC4150/BC4155 離子結(jié)合型果膠(ISP)含量檢測試劑盒

BC2640/BC2645 果膠裂解酶(PL)活性檢測試劑盒

多聚半乳糖醛酸酶(PG)檢測試劑盒 微量法 多聚半乳糖醛酸酶(PG)檢測試劑盒 微量法

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