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  • 肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
產品名稱：

肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
產品品牌： SOLARBIO/索萊寶 價格：
廠商性質： 生產廠家 產品時間： 2024-04-12
儲存條件
-20℃
中文名稱
肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
有效期
6個月
單位
盒
推薦
若使用96孔板測定，需使用96孔UV板，推薦貨號YA0602
英文名稱
Cinnamyl Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase(CAD) Activity Assay Kit
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

產品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號BC4175-100T/96S
規格100T/96S供貨周期現貨
主要用途肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測應用領域環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合

肉桂醇脫氫酶（CAD）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC4175
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱規格保存條件
提取液液體120 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一粉劑×1瓶-20℃保存
試劑二液體×1瓶2-8℃保存
試劑三液體25 mL×1瓶2-8℃保存
溶液的配制：

  1. 提取液：內含不溶物，使用前搖勻。

  2. 試劑一：臨用前加入5 mL試劑三溶解。可溶解后分裝-20℃保存，避免反復凍融。

  3. 試劑二：液體置于試劑瓶內玻璃管中。臨用前加入15 mL乙醇充分混勻，配好后2-8℃保存。

  4. 工作液的配制：將試劑一、試劑二、試劑三按1:1:2（V:V:V）的比例配制工作液，工作液現用現配。

產品說明：
CAD 是木質素生物合成途徑中的關鍵酶之一，催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成與之相應的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中，研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理，為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。
CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+，在340nm下測定NADPH消耗速率，即可反映CAD活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96孔UV板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰、乙醇和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測。
2、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
 

  1. 紫外分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至340nm，紫外分光光度計蒸餾水調零。

  2. 操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑：

試劑名稱空白管測定管
樣本（µL）
20
蒸餾水（µL）20
工作液（µL）180180
在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入上述試劑，充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1，迅速置于25℃水浴或培養箱5min（酶標儀有控溫功能可將溫度調至25℃），拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2，計算ΔA測定管=A1測定-A2測定，ΔA空白管=A1空白-A2空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。
三、CAD酶活計算
A、按微量石英比色皿計算：
1、按蛋白濃度計算
酶活定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2、按樣本質量計算
酶活定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活（U/g 質量）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=321.54×ΔA÷W
3、按細菌或細胞數量計算
酶活定義：每104個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷（500×V樣÷V樣總）÷T= 0.643×ΔA
ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應體系總體積，2×10-4L；V樣：反應體系中樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質量，g；T：反應時間，5min；500：細菌或細胞總數，500萬；109：單位換算系數，1mol=109nmol。
B、按96孔UV板計算：
將將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm（96孔板光徑）進行計算即可。

注意事項：

  1. 當A1小于0.8，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定。

  2. 空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.04。

實驗實例：

  1. 取約0.1g三葉草葉，加入1mL提取液進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清，按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測定計算ΔA測定管= A1測定-A2測定=1.7889-1.7045=0.0844，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9630-0.9433=0.0197，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.0844-0.0197=0.0647，按樣本質量計算得：CAD酶活（U/g 質量）=321.54×ΔA÷W=208.0364 U/g 質量。

相關系列產品：
BC2030/BC2035 異檸檬酸裂解酶（ICL）活性檢測檢測試劑盒
BC3170/BC3175 乙酸激酶（ACK）活性檢測試劑盒

肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法 肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

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