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專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC3120-50T/24S
更新時間：2025-04-21
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1253
010-50973130
產(chǎn)品分類
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植物脫氫酶（PDHA）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號: BC3120
規(guī)格: 50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體100 mL×1瓶 (自備) | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：使用前加少量水溶解，定容至30 mL，避光、4℃保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）；
試劑三：自備乙酸乙酯。提供一60mL棕色試劑瓶。
產(chǎn)品說明：
生物體的脫氫酶(Plant dehydrogenase , PDHA)的活性在很大程度上反映了生物體的活性狀態(tài)，能直接表示生物細(xì)胞對其基質(zhì)降解能力的強(qiáng)弱。
受氫體2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即TTC）在細(xì)胞呼吸過程中接受氫以后，其還原產(chǎn)物三苯基甲替（Triphenyl Formazone，即TFF）呈現(xiàn)紅色，在波長485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測定其吸光值，即得植物脫氫酶活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
臺式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、冰、研缽/勻漿器、蒸餾水、乙酸乙酯（不允許快遞，請用戶自備）。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱取0.1g的植物組織，用雙蒸水清洗3-4次，用濾紙吸干水分，備用。
二、測定步驟
可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至485nm，乙酸乙酯調(diào)零。
操作表：取5mLEP管依次加入
| 加入試劑 | 對照管 | 測定管 |
| 樣本（g） | 0.1 | 0.1 |
| 試劑一（mL） | - | 1 |
| 試劑二（mL） | 2 | 1 |
| 充分混勻，37℃，暗培養(yǎng)3h，取出后立即冰浴5min，去濾液，盡量用濾紙吸干樣本，置于研缽/勻漿器中。 | ||
| 試劑三（mL） | 1 | 1 |
| 充分研磨（建議在通風(fēng)櫥操作）后全部移至離心管中，用少量試劑三沖洗研缽，一起加入離心管，用試劑三定容至2mL，10000rpm/min，4℃，離心5min，取上清，測定485nm下的吸光值。計(jì)算ΔA=A測定-A對照。 | ||
三、脫氫酶活力計(jì)算
酶活單位定義：在37℃時，每小時每克組織樣本使反應(yīng)體系吸光值每增加0.01為一個酶活單位。
脫氫酶活性（U/g/h）=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W
T：反應(yīng)時間，3h；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
配制好的試劑一避光保存于4℃，盡量在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。
試劑三易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請穿實(shí)驗(yàn)服，戴口罩，戴乳膠手套操作。
反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng)，并去除干凈殘留的反應(yīng)液。
如果測定出來的吸光值較大，需把樣本適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測定，注意計(jì)算公式乘以稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
稱取1g蘆薈葉片，用雙蒸水清洗3-4次，用濾紙吸干水分，按照測定步驟進(jìn)行操作，測得計(jì)算ΔA=A測定-A對照=0.120-0.012=0.108，計(jì)算酶活得：
脫氫酶活性（U/g/h）=33×ΔA÷W=3.5964 U/g/h。
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