|
| 品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
| 分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC3340 |
| 規格 | 50T/48S | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 糖原磷酸化酶a（GPa）檢測 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合 |
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3340
規格：50T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體50mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑五 | 粉劑×3支 | -20℃保存 |
試劑六 | 粉劑×3支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前加入1.25 mL蒸餾水，充分混勻；2-8℃保存2個月；可分裝后-20℃保存4周，避免反復凍融；
2、
3、 試劑三：臨用前加入1.25 mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復凍融；
4、 試劑四：臨用前加入1.25mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復凍融；
5、 試劑五：臨用前取一支加入1 mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復凍融；
6、 試劑六：臨用前取一支加入1 mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復凍融；
7、 工作液的配制：臨用前根據實驗所需用量，按照試劑一：試劑二：試劑三：試劑四：蒸餾水=740μL: 20μL: 20μL: 20μL: 50μL（1T的量）的比例，充分混勻，現用現配。
產品說明：
糖原磷酸化酶是糖原分解代謝中的關鍵酶，催化糖原的磷酸化反應。該酶分為有活性的糖原磷酸化酶a（Glycogen phosphorylase a, GPa）和無活性的糖原磷酸化酶b（Glycogen phosphorylase b, GPb）兩種形式。糖原的分解主要在糖原磷酸化酶a的催化下進行。未添加激活劑時，糖原磷酸化酶a催化糖原和無機磷產生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH，在340nm下測定NADPH上升速率，即可反映糖原磷酸化酶a活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、恒溫培養箱/水浴鍋、電子天平、可調式移液器、研缽/勻漿器、1 mL石英比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：按照組織質量（g）︰提取液體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液）進行冰浴勻漿，然后8000 g，4℃，離心10 min，取上清置于冰上待測。
2、細菌或者細胞：先收集細胞或細菌樣本到離心管內，棄上清，按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）。8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）：直接檢測。若有渾濁可以離心后取上清進行測定。
二、測定步驟
1、 紫外分光光度計預熱30 min以上，調節波長至340 nm，蒸餾水調零。
2、 臨用前工作液置于37℃預熱5min。
在石英比色皿中依次加入50 μL 樣本、50 μL試劑五、50 μL試劑六、850 μL工作液，充分混勻10s，記錄340nm處10s時吸光值A1，37℃水浴鍋或者恒溫培養箱反應10min，反應后拿出迅速擦干測定10min10s時吸光值A2。計算ΔA = A2- A1。
三、 糖原磷酸化酶a (GPa)活性計算
1. 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GPa（U/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2. 按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GPa（U/g 質量）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=321.54×ΔA÷W
3. 按樣本體積計算
單位定義：每mL液體每分鐘產生1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位
GPa（U/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109] ÷V樣÷T=321.54×ΔA
4. 按細胞數量計算
單位定義：每1萬個細胞每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GPa（U/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109] ÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T=321.54×ΔA÷細胞數量
V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，10 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；細胞數量：以萬計；109：換算單位，1mol=109 nmol。
注意事項：
1、如果測定吸光值ΔA＞0.8，建議稀釋樣本后再測定，計算公式中乘以稀釋倍數；如果測定吸光值較低或接近空白OD值，建議增加反應中的樣本體積或者樣本質量后再進行測定。
實驗實例：
1. 稱取0.1 g兔子肝臟組織，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，8000 g，4℃條件下離心10 min；取上清置于冰上待測。按照測定步驟操作，計算ΔA=A2-A1=0.414-0.318=0.096，按公式計算活性：
GPa（U/g 質量）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=321.54×0.096÷0.1 =308.68 U/g 質量
糖原磷酸化酶a（GPa）檢測試劑盒 糖原 糖原磷酸化酶a（GPa）檢測試劑盒 糖原
地址：北京通州區馬駒橋聯東U谷景盛南四街15號85A三層
郵箱：3193328036@qq.com
傳真：
