Solarbio ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術。將抗人IL-1β單克隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本,標準品和樣本中的人IL-1β會與酶標板上的包被抗體充分結合;洗板后加入生物素化抗人IL-1β抗體,該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的人IL-1β發(fā)生特異性結合;洗板后加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結合;洗板后加入顯色劑底物TMB,若反應孔中樣品存在不同濃度的人IL-1β,則HRP會使無色TMB變成不同深淺(正相關)的藍色物質,加入終止液后反應孔會變成黃色;最后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應孔樣品吸光度(OD),樣本中的人IL-1β濃度與OD成正比,通過繪制標準曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中人IL-1β的濃度。
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