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酸性轉化酶活性計算說明

更新時間:2021-03-12點擊次數:2303
  蔗糖轉化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關鍵酶之一。根據*適 pH,將高等植物Ivr分為酸性轉化酶(AI)和中性轉化酶(NI)兩種類型。AI主要存在于細胞液泡或自由空間中,*適 pH 為4.5~5.0(酸性),通過降解液泡中蔗糖,調節液泡中蔗糖的利用和果實內糖類的積累。AI催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。

  酸性轉化酶(AI)的活性計算如下:

  標準條件下測定的回歸方程為y=0.0016x-0.001;x為標準品濃度(µg/mL),y為吸光值。

(1)按蛋白濃度計算

  單位定義:37℃每mg蛋白每分鐘產生1µg還原糖定義為一個酶活性單位。

  NI活性(U/mg prot)=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷Cpr

(2)按鮮重計算

  單位定義:37℃每g組織每分鐘產生1µg還原糖定義為一個酶活性單位。

  NI活性(U/g)=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷W

  V1:加入反應體系中樣本體積,0.2mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;T:反應時間:30min。

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