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雷帕霉素的免疫抑制作用雷帕霉素雷帕霉素(Rapamycin,RAPA,RPM),又名Sirolimus,分子式為C51H79NO13,分子量為914.2,為白色固體結(jié)晶,熔點(diǎn)為183-185℃,親脂性,溶解于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等有機(jī)溶劑,極微溶于水,屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。起初RAPA被研究作為低毒性的抗真菌藥物,1977年發(fā)現(xiàn)RAPA具有免疫抑制作用;1989年開始把RAPA作為治療器官移植的排斥反應(yīng)的新藥進(jìn)行試用。雷帕霉素(RAPA)通過不同的細(xì)胞因子受體阻斷信號傳導(dǎo),阻...
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細(xì)胞凍存液的原理及配制方法細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在...
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BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測蛋白濃度的原理及特點(diǎn)堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+,Cu+與BCA試劑形成紫藍(lán)色的絡(luò)合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS,TritonX-100,Tween不影響檢測結(jié)果,但受螯合劑(EDTA,EGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類的影響。實驗中,若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用考馬斯亮藍(lán)(Bradford)蛋白濃度測定試劑盒。BCA法蛋白濃度檢測比考馬斯亮...
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非變性組織/細(xì)胞裂解緩沖液內(nèi)含非離子型去垢劑,能裂解細(xì)胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗體結(jié)合或酶學(xué)活性,因此適宜于進(jìn)行免疫共沉淀。另外,有些抗體對非變性蛋白具有更高的結(jié)合能力或只能識別非變性蛋白的抗原位點(diǎn),這種情況應(yīng)該使用非變性裂解。根據(jù)使用量,取每1ml裂解液加入10ulPMSF,使PMSF的終濃度為1mM。混勻備用(PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加)。1、樣品前處理:對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PB...
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ELISA實驗中文酶聯(lián)免疫吸附試驗。可用于測定抗原,也可用于測定抗體。間接法是多種實驗方法中常用方法。elisa間接法原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。elisa間接法操作步驟如下:(1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。(2)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,在洗滌過程中被洗去。(3...
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因為ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。已成為分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題,它是一種特殊的試劑分析方法。elisa可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計出各種不類型的檢測方法。elisa可根據(jù)抗原抗體的結(jié)合情...
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國內(nèi)ELISA試劑盒發(fā)展起步較晚,1985年才研制了我國*批國產(chǎn)生化診斷試劑。但受益于醫(yī)療消費(fèi)水平的提高、醫(yī)療體制改革的推動、國家產(chǎn)業(yè)政策的扶持,以及本身具有的一次性消費(fèi)的特點(diǎn),IVD行業(yè)將會以15%~20%的速度高速增長。特別是醫(yī)改中的某些規(guī)定,讓我們看到了體外診斷試劑未來極富想象力的創(chuàng)富空間。比其對基本藥物的“零加成”的規(guī)定,使得基層醫(yī)院藥品收入頓時減少,于是化驗單成為另一個開源對象,檢驗科的地位也將提升,而且隨著例行體檢的加快普及,體檢的人數(shù)越來越多。新醫(yī)改機(jī)會盡管落后...
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elisa試劑盒實驗時的操作步驟有標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋、加樣、溫育、洗滌、顯色等等,然而在顯色這一步驟可能碰到的問題有:1、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。相應(yīng)解決辦法:1、顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用;2、加樣時保持顯色劑不外流;3、A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。顯色是elisa實驗的后一步溫育反應(yīng),所以顯色也是重要步驟之一。
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